肝细胞CREBH在曲美他嗪保护心肌缺血/再灌注损伤中的机制
一、摘要
临床研究发现曲美他嗪对心脏介入术后的缺血/再灌注损伤具有保护作用，其保护机制可能与降低血清C反应蛋白（CRP ）有关。CRP的产生于肝细胞内质网应激，肝细胞内质网上与炎症反应相关的循环腺苷酸应答元件结合蛋白-H（CREBH）激活，诱导急性期反应，主要调控CRP合成。本课题组前期的研究也发现，心肌缺血/再灌注后，触发心肌细胞内质网应激并可通过激活炎症反应参与心肌损伤，其中包括CRP所致的炎症损伤，而核转录因子-?B （NF-?B）在在这一机制中具有重要的桥梁作用。由此，我们假设心肌缺血/再灌注后曲美他嗪可通过调控肝细胞CREBH从而调控心肌炎症反应损伤。因此，本课题组将在自身前期研究基础上，通过动物实验及蛋白印迹等研究方法，探讨CREBH在曲美他嗪的抗炎作用中的重要地位，并通过电泳迁移实验探讨NF-?B在这一机制中的重要作用。
二、立题依据
（包括国内外研究现状、研究意义、拟解决的关键问题，限1000~2000字，附主要参考文献目录）
（一）、国内外研究现状、研究意义
临床研究发现曲美他嗪对心脏介入术后的缺血/再灌注损伤具有保护作用，其保护机制可能与降低血清C反应蛋白（CRP C-reactive protein）有关[1，2]。
CRP的产生于内质网应激有关：肝细胞内质网应激，可诱导急性期反应（APR acute phase response），从而产生CRP，并参与了在冠心病的发生、发展[3]。主要研究理论如下：在代谢异常、炎症等因素刺激下，内质网应激使肝细胞内质网上与炎症反应相关的循环腺苷酸应答元件结合蛋白-H（CREBH cyclic AMP response element-binding protein H）激活，诱导急性期反应，主要调控CRP合成[4，5，6]。从而提出假设：在冠心病的发展中，肝细胞内质网应激后激活的炎症反应参与整个疾病的病理生理过程，且与脂质异常具有同等重要的致病作用。
本课题组前期的研究也发现，心肌缺血/再灌注后，触发心肌细胞内质网应激（ERS endoplasmic reticulum stress），并可通过激活炎症反应参与心肌损伤，其中包括CRP所致的炎症损伤[7]，而核转录因子-?B （NF-?B nuclear factor ?B）在心肌内质网应激-炎症反应机制中具有重要的桥梁作用，这一机制在心肌缺血/再灌注损伤中也是首次被我们的前期研究证实。
我们前期的研究已经发现心肌炎症反应机制在心肌缺血/再灌注损伤中的重要作用，并且提示肝细胞CREBH所参与的内质网应激后，急性期反应所产生的CRP等所致的炎症损伤起了重要作用。曲美他嗪的抗CRP作用在心肌缺血/再灌注损伤中具有重要作用，进一步探讨肝细胞CREBH在曲美他嗪对心脏缺血/再灌注损伤保护作用机制中的地位更具必要性和紧迫性。因此，本课题组将在自身前期研究基础上，进一步揭示心肌缺血/再灌注后肝细胞CREBH对心肌炎症反应机制的调控作用，并深入探讨曲美他嗪对肝细胞CREBH的具体作用机制。从而为急性冠脉综合征患者心脏介入术后缺血/再灌注损伤防治提供更深刻的病理生理基础。
（二）、拟解决的关键问题
1、心肌缺血/再灌注后肝细胞CREBH在心肌内质网应激-炎症反应中的调控机制。
2、曲美他嗪对心肌缺血/再灌注后肝细胞CREBH作用机制研究。
参考文献：
[1] Kuralay F, Altekin E, Yazlar AS, Onvural B, Goldeli O.Suppression of angioplasty-related inflammation by pre-procedural treatment with trimetazidine.Tohoku J Exp Med.2006 Mar;208(3):203-12.
[2] Di Napoli P, Taccardi AA, Barsotti A. Long-term cardioprotective action of trimetazidine and potential effect on the inflammatory process in patients with ischemic dilated cardiomyopathy. Heart. 2005;91:161-165.
[3] Liver protein that triggers inflammation may be linked to coronary artery disease, say U-M researchers.
[4] Zhang K, Shen X, Wu J, Sakaki K, Saunders T, Rutkowski DT, Back SH, Kaufman RJ. Endoplasmic Reticulum Stress Activates Cleavage of CREBH to Induce a Systemic Inflammatory Response. Cell. 2006;124:587-99.
[5] Ke zhong Zhang. Randal J. Kaufman. From endoplasmic-reticulum stress to the inflammatory response. Nature 2008; 454, 455-462.
[6] Zhang C, Wang G, Zheng Z, Maddipati KR, Zhang X, Dyson G, Williams P, Duncan SA, Kaufman RJ, Zhang K.ER-tethered transcription factor crebh regulates hepatic lipogenesis, fatty acid oxidation, and lipolysis upon metabolic stress. Hepatology. 2011. doi: 10.1002/hep.24783.
[7] Wang QQ（王齐齐）, Qiu YG, Zhu YJ, Zhu JH, Wang LH, Hu XS, Hu SJ, Zheng LR, Tao QM, Zhang FR, Zhang Y.Cyclophosphamide protects against myocardial ischemia-reperfusion injury in rats: one of the therapeutic targets is high sensitivity C-reactive protein. J Thorac Cardiovasc Surg. 2009;137:991-6.
三、研究目标与研究内容
（一）、研究目标
1、证实肝细胞CREBH参与了缺血/再灌注后心肌内质网应激-炎症损伤。
2、曲美他嗪可通过调控CREBH作用而保护心肌缺血/再灌注损伤。
3、预期发表2篇以上SCI论文，并培养硕士及博士研究生2名，参与国际会议交流及学术活动。
（二）、研究内容
1、研究肝细胞CREBH在心肌缺血再灌注后炎症损伤中的重要作用，并NF-kb在这一机制中的重要作用。
2、研究曲美他嗪对肝细胞CREBH的作用机制，及对心肌的抗炎保护机制。
四、研究方案（包括研究对象、研究方法、技术路线、统计方法等）
1、研究对象：成年、雄性SD大鼠。
、研究模型：心脏缺血/再灌注损伤，由结扎心脏冠状动脉前降支半小时，并实现再灌注12小时来实现。
3、研究分组：假手术组，空白对照组，曲美他嗪组。
4、主要研究方法：蛋白印迹，RT-PCR，ELISA，病理检查，血流动力学检查等方法。
5、技术路线：
6、统计方法：均数间的比较采用多因素方差分析。